免疫组化实验常见问题

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结果阴性的问题排查

1. 抗体浓度和质量问题以及抗体来源选择错误； 
2. 抗原修复不全，换修复液或加强修复； 
3. 织切片本身这种抗原含量低，设阳性对照片； 
4. 血清封闭时间过长；DAB 孵育时间过短； 
5. 细胞通透不全，抗体未能充分进入胞内参与反应。

非特异性染色（着色一片黄/背景深）的问题排查

1. 抗体孵育时间过长，抗体浓度；
2. 多抗易出现非特异性，可选择单抗；
3. 内源性过氧化物酶和生物素灭活不够；
4. 非特异性组分与抗体结合，延长血清封闭时间；
5. DAB 孵育时间过长或浓度过高；
6. PBS 冲洗不充分，残留抗体结果增强着色；
7. 标本染色过程中经常出现干片；
8. 脱蜡不充分；
9. 二抗与标本的内源性组织蛋白有交叉反应。

信号定位与预测不符的问题排查

1. 组织固定不及时，抗原扩散移位；
2. 抗体选择错误；
3. 膜蛋白核质染色：抗原修复过长，导致细胞膜破坏，膜蛋白转移。

染色弱阳性的问题排查

1. 固定方式不当或固定时温度过高，影响到抗原的数量和质量；
2. 不适当的抗原修复方式，抗原决定簇暴露不足；
3. 抗体的稀释度是否过高或者孵育的温度/时间不足；
4. 孵育抗体前切片上遗留了过多的冲洗液；
5. 孵育时切片未放置水平，导致抗体孵育不均匀。