【Biorbyt 科研专题】荧光蛋白 /Fluorescent Proteins

 

荧光蛋白彻底改变了分子和细胞生物学，为可视化和理解生物过程提供了强大的工具。这些通常是海洋生物中天然存在的蛋白质，这些荧光标记使科学家能够以惊人的精度标记和追踪蛋白质、细胞和组织。在种类繁多的荧光蛋白中，有几种已成为世界各地研究实验室不可或缺的物质。

荧光蛋白在特定波长的激发下发光，从而可以在荧光显微镜下进行可视化。从维多利亚水母中发现的绿色荧光蛋白 (GFP) 为通过基因工程开发各种彩色荧光蛋白铺平了道路。这些蛋白质具有多种应用，包括研究基因表达、蛋白质定位和细胞追踪。

针对这些蛋白质的抗体能够在各种实验环境中精确检测、定量和分析这些荧光蛋白。以下是介绍这些荧光蛋白的激发光和发射光的详细列表：

 

基础荧光蛋白

GFP（绿色荧光蛋白）、YFP（黄色荧光蛋白）和 RFP（红色荧光蛋白）是荧光成像的基础工具。这些蛋白质对于实时可视化和研究细胞和分子过程至关重要。

GFP（绿色荧光蛋白）：GFP 发出绿色荧光（在 395/475 nm 处激发并在 509 nm 处发射），并且已经过广泛修改以提高其亮度和稳定性，如eGFP（在 488 nm 处激发并在 509nm 处发射）。

YFP（黄色荧光蛋白）：YFP是 GFP 的衍生物，发出黄色荧光（在 514 nm 处激发，在 527 nm 处发射），在多色标记实验中特别有用。

RFP（红色荧光蛋白）：RFP具有远红光发射，是深层组织成像和最大限度降低光毒性的理想选择。这些蛋白质对于实时可视化和研究细胞和分子过程至关重要。

GFP、YFP 和 RFP 抗体的应用

• 蛋白质印迹法：检测 GFP、YFP 和 RFP 标记蛋白，验证它们在各种样本中的表达。

• 免疫荧光：将这些标记蛋白质定位在细胞内，有助于研究细胞动力学并提供详细的成像数据。

• 流式细胞术：测量它们在细胞群中的表达，促进细胞分选和功能分析。

   

   

与数百种青色、绿色和黄色荧光蛋白相比，在光谱的橙色和红色波长（约 560 nm 至 650 nm）中开发的探针只有少数。尽管如此，现存的少数探针已从珊瑚中分离出来，并显示出在各种成像场景中的应用潜力。

通常称为红色荧光蛋白 RFP 的探针，例如 DsRed、TagRFP 和 tdTomato，实际上发射光谱橙色明显多于红色。

tdTomato：明亮的红色灯塔

tdTomato 是一种出色的红色荧光蛋白，以其高亮度和光稳定性而闻名。非常适合活细胞成像和长期研究。它发出鲜艳的红色荧光（激发波长为 553 nm，发射波长为 581 nm），与其他荧光蛋白很容易区分，便于进行多色成像实验。具体请参考往期视频：亮度最强的荧光蛋白 —— tdTomato

tdTomato 抗体应用

• 蛋白质印迹法：检测tdTomato标记蛋白，验证其在细胞或组织裂解物中的表达。

• 免疫组织化学（IHC）：可视化固定组织中的tdTomato表达，提供空间和形态背景。

• 免疫沉淀（IP）：从复杂混合物中丰富tdTomato标记蛋白质以供进一步分析。

 

mCherry：多功能红色标记蛋白

mCherry 是另一种流行的红色荧光蛋白，源自 DsRed。它在 587 nm 处激发，在 610 nm 处发射，提供明亮而稳定的红色荧光。mCherry 是单体，适合与其他蛋白质融合而不会破坏其功能。它的稳健性和多功能性使其成为各种应用的首选标记，包括研究蛋白质-蛋白质相互作用和监测细胞事件。具体请查看往期文章：背景更低的红色荧光蛋白—mCherry

mCherry抗体的应用

• 蛋白质印迹法：检测 mCherry 标记的蛋白质，确认其表达水平。

• 免疫荧光（IF）：在细胞内定位 mCherry 标记的蛋白质，揭示亚细胞结构和动态。

• 流式细胞术：量化细胞群中的 mCherry 表达，有助于分类和表型分析。

   

  mOrange：亮橙色荧光蛋白

mOrange 源自 DsRed，可提供明亮的橙色荧光（激发波长为 548 nm，发射波长为 562 nm）。其独特的颜色使其在多色标记实验中非常有用，可让研究人员同时观察多种细胞成分。mOrange 的亮度和稳定性使其成为需要精确清晰成像的研究的宠儿。

mOrange 抗体应用

• 蛋白质印迹法：检测 mOrange 标记的蛋白质，确认其表达谱。

• 免疫荧光（IF）：提供各种细胞类型和组织中 mOrange 标记蛋白质的可视化。

• 免疫沉淀：从复杂的生物样本中分离 mOrange 标记的蛋白质。

   
   

 

mScarlet：鲜红色的创新者

mScarlet 是红色荧光蛋白家族的新成员，具有出色的亮度和成熟速度。mScarlet 的激发波长为 569 nm，发射波长为 594 nm，比许多其他红色荧光蛋白更亮。其高量子产率和光稳定性使其成为超分辨率显微镜和其他先进成像技术的绝佳选择。

mScarlet 抗体应用

• 蛋白质印迹法：检测 mScarlet 标记的蛋白质，验证它们的存在和表达。

• 免疫荧光（IF）：在细胞环境中可视化 mScarlet 标记的蛋白质，提供对细胞结构的洞察

• 免疫共沉淀（Co-IP）：研究 mScarlet 标记蛋白质与其伙伴之间的相互作用。

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其他荧光蛋白抗体

CFP抗体：orb443161

 

Venus（YFP 的变体）抗体：orb334993

 

mRuby 抗体：orb1463286

 

mStrawberry 抗体：orb688464

 

mPlum 抗体：orb763363

 

mBanana抗体：orb1463270