【Biorbyt 技术】如何选择合适的直标抗体？

 

什么是直标抗体？

       大多数蛋白质和细胞分析的免疫实验技术需要使用特异性识别目的抗原的一抗和用于可视化的标记二抗。而直接将标记物（比如HRP, Biotin, FITC, CY3, CY5, PE，CF系列荧光素等）与一抗进行偶联获得的就是直标抗体。使用直标抗体用于免疫实验可以同时实现特异性识别抗原和可视化，不再需要使用二抗。

 

       比如HRP-标记的一抗，用于IHC实验不再需要二抗，可以直接与DAB底物显色；用于WB实验也可以省略二抗孵育步骤，直接用显色液显影成像。

 

       而Biotin-标记的一抗有些特殊，因为免疫实验中需要biotin-avidin（生物素-亲和素/链霉亲和素）反应放大系统，所以还需要使用HRP标记的亲和素或者链霉亲和素识别才能进行显色显影。

 

       同理，所有荧光素标记的一抗不再需要使用荧光二抗，直接观察一抗偶联的荧光信号即可。

 

 

直标抗体与非标记抗体对比

直标一抗：适用于直接免疫实验（组化，荧光，流式，WB），由于标记物直接偶联在特异性一抗上，避免二抗假阳性，所以特异性高，避免非特异染色。不需要使用二抗缩短实验时间，快速方便。但是由于可偶联的位点有限而灵敏度低，所以直标一抗适用于检测表达量较大的抗原，如细胞骨架等。

 

非标记抗体：适用于间接免疫实验（组化，荧光，流式，WB），需要搭配带标记的二抗使用。价格相对直标一抗较实惠，而且由于一抗和二抗反应中一个一抗分子可以结合多个荧光标记二抗，所以灵敏度高，可放大信号，适合表达量较低的蛋白抗原检测。

 

 

双标免疫荧光中抗体的选择

       对于在一个实验中同时检测多个目标蛋白，比如研究中常常使用双标记免疫荧光实验来观察两个抗原蛋白在细胞中的共定位情况。这种情况使用直标一抗可以相对减少二级交叉反应的风险，所以最简单的方式就是选择两个带不同荧光颜色的直标一抗就可以了。

 

       但是如果实在买不到两个直标抗体，或者自己已经采购了非标记的抗体，该如何选择二抗才能防止交叉反应呢？不要急，凭借多年的免疫实验经验，biorbyt 技术小编这就来给大家做一个双标免疫荧光中抗体选择的方案：

 

•2个间标抗体，需要不同host，不同的荧光标记物二抗；

•2个直标抗体，可以相同host，不同的荧光标记物偶联；

•1个间标抗体+1个直标抗体，不同host，不同荧光标记物，两抗体可共同孵育；

•1个间标抗体+1个直标抗体，相同host，不同荧光标记物，需先孵育间标+二抗，后再孵育直标。

 

       Host 就是指一抗的物种来源，记住以上原则，就再也不怕不会选双标抗体啦！

 

 

Biorbyt 提供抗体标记服务

       Biorbyt 除了提供各种靶标类型和不同标记物的直标一抗产品外，还提供一系列荧光和酶的抗体标记偶联服务。

 

不同酶和荧光素标记物颜色   
 

 

       Biorbyt目前提供HRP，Biotin，FITC，CF荧光系列（CF405M，CF488A，CF594和CF647）的抗体标记偶联服务，欢迎咨询。