Western Blot实验常见问题

---

1. 无条带：抗体用错，转膜出错，抗原无表达，试剂失效等；  

2. 细微弱带：上样量少，抗体浓度低，ECL发光液失效等；
3. 高背景：封闭不够，一抗浓度高，洗膜不充分；   
4. 非特异性条带：抗体特异性差，也可能样品量大，抗体浓度高；   
5. 条带出现边缘规则的白圈：转膜时膜和胶之间有气泡；   
6. 条带中间出现白色：高浓度HRP把底物消耗过快后不发光；   
7. 膜上很多黑点：膜上杂质与抗体非特异结合，洗膜充分，封闭液混匀；   
8. 条带拖尾：蛋白裂解不好，蛋白量大，抗体孵育时间长，浓度高等；   
9. 出现非均一性背景：洗抗体和发光时膜出现风干情况；   
10. 条带弯曲不平整：胶配置不均匀，胶中有气泡杂质，玻璃板没洗干净，电流不均一等；   
11. 条带蛋白分子量偏高/偏低：分离胶浓度选择不恰当，蛋白质降解；   
12. 所有条带连成片：上样量大或电泳中途停止过长，样品弥散。