ELISA实验中标准曲线的绘制（附软件下载链接）

在定量ELISA实验中，通常利用已知浓度的标准品建立 OD值与浓度之间的标准曲线， 再根据待测样品的OD值计算相应浓度。 本文以Curve Expert 1.3为例介绍标准曲线绘制、 曲线拟合和样品浓度计算方法。

绘制标准曲线前的准备

开始拟合前，需要整理标准品及待测样品的实验数据。

建议准备以下信息

• 标准品浓度及对应OD值；
• 按实验方案处理后的Blank数据；
• 待测样品OD值；
• 样品稀释倍数；
• 标准品浓度单位。

标准品浓度与OD值应一一对应。 如使用重复孔，应按照实验方案整理用于后续拟合的数据。

Curve Expert绘制ELISA标准曲线

1. 启动 Curve Expert

打开Curve Expert 1.3，准备录入标准品数据。

2. 输入标准品OD值和浓度

按原示例，在X轴输入标准品OD值； 双抗体夹心实验可输入OD减去Blank后的数值。 在Y轴输入对应的标准品浓度。

标准品OD值与浓度输入示例

3. 打开曲线拟合窗口

数据输入完成后，点击曲线拟合按钮 ，进入模型选择窗口。

4. 生成并查看拟合曲线

点击OK后， 软件会生成候选拟合模型。 依次选择模型可查看对应的拟合曲线。

5. 选择拟合曲线

比较各模型与标准品数据的拟合情况， 并查看软件提供的相关系数。

注意： 按原示例，可使用软件显示的 r值辅助判断拟合程度。 r值越接近1，表示拟合结果与输入数据的相关程度越高。 同时应结合标准品数据与拟合曲线的整体表现进行判断。

6. 计算待测样品浓度

按Ctrl + L打开计算窗口， 输入待测样品OD值并点击 Calculate， 即可得到对应浓度。

如果样品进行了N倍稀释， 最终结果还需按实际稀释倍数换算。

输入待测样品OD值计算对应浓度

7. 获取拟合曲线方程

在拟合结果窗口空白处单击鼠标右键， 选择Information。 在弹出的窗口中点击 Copy， 即可复制拟合方程及参数。

原示例输出结果

Rational Function: y=(a+bx)/(1+cx+dx^2)

a = -5.9369973

b = 166.94422

c = 1.8471095

d = -0.86731519

方程形式及系数取决于实际标准品数据和所选拟合模型。

8. 调整曲线图形属性

选择Graph Properties， 可修改X轴、Y轴及其他图形显示参数。

调整标准曲线坐标轴及图形属性

标准曲线结果分析注意事项

完成拟合后，除查看软件计算结果外， 还应结合标准品范围、样品稀释倍数和实验记录判断最终浓度。

数据分析时建议检查

• 标准品浓度与OD值是否对应正确；
• Blank是否按照实验方案处理；
• 拟合曲线是否能够合理覆盖标准品数据；
• 待测样品检测信号是否位于标准曲线有效范围内；
• 是否按实际稀释倍数换算样品浓度；
• 浓度单位是否与标准品保持一致。

如果待测样品的信号明显超出标准品覆盖范围， 应结合具体实验方案判断是否需要调整样品条件后重新检测， 不宜仅依赖曲线外推获得结果。

Curve Expert 1.3软件下载

本文操作示例使用Curve Expert 1.3。 以下按钮跳转至外部软件下载页面， 请根据所在单位的软件使用及信息安全要求自行确认后使用。

下载 Curve Expert 1.3

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