WB实验总出现神秘多条带？背后隐藏着蛋白质加工的精密旅程！

 

每一次Western Blot（WB）结果中意想不到的多条带，都不仅是实验的“烦恼”，更可能是细胞对你发出的信号，邀请你窥见一个高度精密的蛋白质加工世界。

别再简单地将其归咎于“非特异性结合”或“降解”了，今天让我们一起解码条带背后的奥秘！

 条带谜团的根源：蛋白质的“加工之旅”

你以为的一条蛋白一条带？太天真啦！许多蛋白质在合成后并非“成品”，而是需要经历一场漫长的旅行和精密的裁剪，才能持证上岗。这条路上，三位关键角色相继登场，共同演绎了这场生命大戏：

🔍什么是信号肽

 

信号肽可称为蛋白质的“导航系统”，通常位于前体蛋白的N端，是一段长约15-30个氨基酸的短肽。它富含疏水氨基酸，能引导新合成的蛋白质穿越细胞膜，定向运输到内质网、线粒体等特定细胞器，甚至分泌至细胞外。一旦完成任务，信号肽便会被酶切除，不参与蛋白质的最终功能。

🛠️什么是前体蛋白？

 

前体蛋白是蛋白质的“未加工原坯”，除了包含成熟蛋白序列，还带有信号肽、前导肽等辅助结构。这些额外序列在翻译后修饰过程中起到关键作用：它们不仅指导空间定位，还保护蛋白在成熟前不被提前激活，为正确折叠和剪切提供结构基础。

这些额外序列在后续的加工过程中会被切除或修饰，以形成具有生物学活性的成熟蛋白。

✅ 什么是成熟蛋白

 

成熟蛋白是经过一系列修饰（如剪切、糖基化、磷酸化等）后形成的“最终功能蛋白”。它已去除所有冗余序列，结构正确折叠，具备生物学活性，可高效执行结合受体、催化反应等任务，是细胞中真正发挥作用的“成品蛋白”。

实战案例解析：看“条带”如何讲故事

案例一：以人类甲状旁腺激素（PTH）（UniProt: P01270）为例：

其前体preproPTH共115个氨基酸；

1–25位：信号肽（后被切除）；

26–31位：前导肽（进一步被去除）；

32–115位：最终加工为成熟PTH（84个氨基酸）。

常被研究的PTH(1–34)片段，对应成熟蛋白的1–34位，实际源于前体蛋白的32–65位。

例如，Biorbyt提供的类似蛋白片段产品：

orb216830（Teriparatide Acetate，PTH(1-34)）

再如：orb1098598（PTH(39-84)）

通常所说的Human PTH(39-84)则指的是成熟PTH蛋白的39-84片段，它对应前体PTH蛋白的氨基酸区间为70-115aa。

 

⚠️ 为什么WB实验中常出现多条带？ 
 

 

案例二：以TGF-β1为例（biorbyt抗体货号orb1294344）：

如下图：图中检测到多个条带，

Pro-TGFβ（约55 kDa）：前体形式，可视为未激活的“原始状态”；

Latent-TGFβ（约43 kDa）：经初步加工形成的潜伏态复合物，暂无生物学活性；

Mature-TGFβ（约13 kDa）：最终成熟形式，可激活SMAD通路，调控细胞生长与分化。

这些条带分别代表了蛋白质不同加工阶段的形态，是翻译后修饰与逐步激活过程的直观体现。

📌 总结与启示

信号肽是导航，前体蛋白是原料，成熟蛋白即成品。一条龙服务，缺一不可。

WB中的多条带不一定是坏事！它可能是蛋白质动态加工过程的真实写照。学会解读它们，能让你的实验结果更有深度，更能揭示生命过程的本质。

下次做WB时，别再为多条带而焦虑。不妨：

查数据库： 在UniProt等数据库查询目标蛋白的分子量和已知的加工形式。

看位置： 判断条带大小是否与预测的前体、成熟形式等相符。

选抗体： 注意抗体说明书标注的识别表位，判断它能检测到哪些形式的蛋白。

 

理解蛋白质从合成到成熟的精密旅程，不仅能破解WB条带之谜，更是窥见生命调控微观之美的窗口。